細(xì)胞培養(yǎng)生物反應(yīng)器的操作方法

點擊次數(shù)：509 更新時間：2025-09-25

　　一、上罐前的準(zhǔn)備‌

　　‌1、細(xì)胞懸液制備‌：將預(yù)培養(yǎng)的細(xì)胞從搖瓶或培養(yǎng)皿中收集，混勻后取1mL進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)，確保接種密度適宜‌。

　　‌2、設(shè)備滅菌‌：檢查反應(yīng)器罐體、管道及電極是否已滅菌(如121℃高壓蒸汽處理)，避免微生物污染‌。

　　‌3、培養(yǎng)基與緩沖液‌：準(zhǔn)備足量培養(yǎng)基，并預(yù)調(diào)pH至目標(biāo)范圍(如7.2-7.4)，滅菌后冷卻備用‌。

　　二、接種與初始培養(yǎng)‌

　　‌1、無菌操作‌：在生物安全柜中，將細(xì)胞懸液通過無菌管道轉(zhuǎn)移至反應(yīng)器內(nèi)，同時通入壓縮空氣輔助混合‌。

　　‌2、參數(shù)設(shè)置‌：

　　‌溫度‌：哺乳動物細(xì)胞通常設(shè)為37℃‌。

　　‌溶氧(DO)‌：初始設(shè)為40%，通過氣體混合(O?/N?/CO?)維持穩(wěn)定‌。

　　‌pH控制‌：使用蠕動泵補加酸/堿或通入CO?調(diào)節(jié)，保持pH在6.5-7.0(視細(xì)胞類型調(diào)整)‌。

　　三、培養(yǎng)過程監(jiān)控‌

　　‌1、定期取樣‌：每24小時在線取樣，檢測細(xì)胞密度、pH及代謝物(如葡萄糖、乳酸)濃度‌。

　　‌2、流加補料‌：根據(jù)營養(yǎng)消耗情況，流加濃縮培養(yǎng)基或特定成分(如氨基酸)，延長細(xì)胞對數(shù)生長期‌。

　　‌3、剪切力控制‌：采用低轉(zhuǎn)速攪拌(如50-100 rpm)或波浪式反應(yīng)器，避免機械損傷‌。

　　四、收獲與清洗‌

　　‌1、終止培養(yǎng)‌：當(dāng)細(xì)胞進(jìn)入衰亡期或產(chǎn)物積累達(dá)峰值時，關(guān)閉自動控制系統(tǒng)‌。

　　‌2、排液與收集‌：通過壓縮空氣將培養(yǎng)液排入廢液桶，分離細(xì)胞與上清液‌。

　　‌3、清洗滅菌‌：用純化水沖洗罐體及組件，0.1M氫氧化鈉浸泡過夜，確保無殘留‌。

　　五、注意事項‌

　　‌1、無菌操作‌：全程需嚴(yán)格避免污染，操作前消毒手套及工具‌。

　　‌2、參數(shù)校準(zhǔn)‌：定期校驗pH、溶氧電極，確保數(shù)據(jù)準(zhǔn)確‌。

　　‌3、放大生產(chǎn)‌：分批式操作可直接放大至工業(yè)規(guī)模(如12000L)，但需優(yōu)化攪拌與傳質(zhì)效率‌。

　　通過以上步驟，可高效完成細(xì)胞培養(yǎng)生物反應(yīng)器的操作，適用于單克隆抗體、疫苗等生物制品的生產(chǎn)‌。